多肽熒光標(biāo)記,多肽同位素,多肽定制合成,多肽熒光如何標(biāo)記,多肽熒光標(biāo)記方法,多肽熒光標(biāo)記是什么?
異硫氰酸熒光素(FITC)比羧基熒光素活性更高,羧基熒光素在使用前需要激活。FITC主要與巰基反應(yīng),如還原型半胱氨酸的側(cè)鏈,尤其是多肽或蛋白中的氨基。
對于許多應(yīng)用來說,在化學(xué)合成過程中引入多肽熒光標(biāo)記是很容易的。例如,在固相合成過程中,F(xiàn)ITC可以與賴氨酸(Lys)或選擇性地脫保護(hù)的鳥氨酸(ornithine)側(cè)鏈,或合成過程中多肽的N端氨基發(fā)生反應(yīng)。在N端標(biāo)記時(shí),建議在*后一個(gè)氨基與異硫氰酸酯和氨基反應(yīng)生成的硫脲鍵之間引入烷基間隔器(alkyl spacer),如氨基乙酸(Ahx)。
鏈接切割需要酸性環(huán)境,在N端標(biāo)記FITC的多肽需要環(huán)化形成熒光素,通常伴隨著*后一個(gè)氨基酸的去除。然而,當(dāng)有間隔劑時(shí),如氨基乙酸,或當(dāng)目標(biāo)肽從樹脂通過非酸性環(huán)境切斷時(shí),這是可以避免的。
空間位阻被認(rèn)為是在熒光染料之前使用Ahx的主要原因,而不是FITC不能直接與多肽偶聯(lián)的原因。Ahx或b-Ala可作為FITC標(biāo)記多肽的間隔物。
多肽熒光標(biāo)記技術(shù)一般來說,生物素、FITC等染料可以任意標(biāo)記在多肽的N端或C端上。但是我們推薦N端標(biāo)記,成功率更高,時(shí)間更短,操作更簡單。由于多肽是從C端合成到N端,所以N端修飾是固相合成的*后一步,不需要額外的偶聯(lián)步驟。相反,如果是c端標(biāo)記,則需要額外的步驟,過程將更加復(fù)雜。
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