請介紹一下你們的純化策略
我公司合成的多肽是用制備型反相HPLC進(jìn)行純化的,所用的兩種流動相中都添加了TFA,pH 2。A相是0.1% TFA于超純水中,B相是0.1% TFA 于ACN 中,pH 2。樣品可以直接用A相溶,或者先用少量B相溶解再用A相稀釋。有時(shí)可能需要用強(qiáng)溶劑如甲酸、乙酸來溶解疏水肽,具體采用哪種方法要看肽序列。在pH 6.8 時(shí)一般很難將肽溶解也很難進(jìn)行純化,因此我們一般是先將肽溶解再用兩種流動相進(jìn)行梯度洗脫。所用的pH 6.8的緩沖液為10 mM醋酸銨于超純水中(流動相A),純ACN(流動相B)。通過紫外檢測器在214 nm處檢測,收集不同組分并用MADLI-TOF MS進(jìn)行成分鑒定,用反相 HPLC分析純度,然后把目的肽凍干,將凍干的肽合并裝入小瓶中,*后,再對合并后的產(chǎn)物進(jìn)行MS和HPLC分析。
|